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植物组织分离法步骤植物组织分离法步骤

学习方法 2025-03-18 05:23:31 已浏览:198次

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植物组织分离法步骤求高手给解答

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2025-03-18 05:23:31

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(1)培养皿准备:取灭菌培养皿一个,置于湿纱布上,在皿盖上注明分离日期、材料和分离人姓名。

(2)培养皿平板制备:用无菌操作法向培养皿中加入25%乳酸1-2滴(减少细菌污染),然后将熔化而冷至45W左右的马铃薯琼胶培养基一管倒入培养皿中,轻轻摇动使成平面(分离细菌时则不能加乳酸)。

(3)切取病组织小块(叶斑病类):取玉米小斑病(Bipolaris maydis)新鲜病叶,选择典型的单个病斑,用剪刀或解剖刀从病斑边缘切取小块(每边长约3一5毫米)病组织数块。

(4)表面消毒;将病组织小块放入70%酒精中浸数秒钟后,按无菌操作法将病组织移入0.1%升汞液中消毒1-3分钟,然后放火灭菌水中连续漂洗三次。也可用漂白粉精片(1-2片),研磨后加灭菌水10ml,消毒5-10分钟。果实、块茎和枝秆等组织内部的病原菌可用脱脂棉蘸70%酒精涂拭病部表面,通过火焰烧去表面酒精,重复进行2-3次,达到表面消毒。

(6)用无菌操作法将病组织小块移至培养基平面上,每培养皿内可放4—5块。

(6)翻转培养皿,放入26-28t恒温箱内培养,3—4日后观察结果。

(7)用无菌操作法自培养皿中选择菌落,挑取少许菌丝及孢子,在显微镜下观察。如系玉米小斑病菌抱子,即可用接种针自菌落边缘挑取小块菌落移入斜面培养基,在26-28℃恒温箱内培养,3-4天后,观察菌落生长情况,如无杂菌生长,即得玉米小斑病菌纯菌种,可置于冰箱中保存。如有杂菌生长,需再次分离获纯培养后,方可移入斜面保存。

2025-03-18 05:23:31

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植物组织分离法是一种将植物组织中的不同细胞类型分离出来的实验方法。首先,取一小段植物组织,如叶片或根部,进行消毒处理以去除外界的微生物。

然后,将组织切割成小块,加入含有酶解液的培养基中,利用酶解液的作用使细胞壁松弛,便于分离。

接下来,用力振荡或轻轻摇动培养皿,使组织块分散为单个细胞或小组织。

最后,通过离心或筛选等方法,将不同类型的细胞分离出来。这种方法常用于植物细胞培养、基因转化等研究领域。

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